الفيدال والرايت بالطريقة السريعة على الشريحة: خطوات العمل وحساب العيارWidal and Wright by the rapid slide method: the steps and how to read the titre

ماذا يقيس كل تحليل؟What each test measures

يبحث التحليلان عن أضداد في مصل المريض تُحدث تراصاً مرئياً مع معلّقات جرثومية مقتولة وملوّنة. في الفيدال تُستخدم مستضدات السالمونيلا التيفية O (الجسمي) وH (السوطي)، ومستضدات الباراتيفية A وB. وفي الرايت تُستخدم مستضدات البروسيلا المجهضة (abortus) والمالطية (melitensis). يوزَّع الكاشف على الشريحة بالترتيب O ثم H ثم PA ثم PB ثم Ab ثم M.Both tests look for antibodies in the patient's serum that produce visible agglutination with killed, stained bacterial suspensions. Widal uses Salmonella Typhi O (somatic) and H (flagellar) antigens and the Paratyphi A and B antigens. Wright uses Brucella abortus and Brucella melitensis antigens. The reagent drops go on the slide in the order O, H, PA, PB, Ab, M.

جدول المعادلة بين الشريحة والأنبوبSlide to tube equivalence

كلما قلّت كمية المصل التي ظهر عندها التراص كان العيار أعلى. هذا هو الأساس الذي تُقرأ به الطريقتان أدناه:The smaller the volume of serum at which agglutination appears, the higher the titre. Both methods below are read on this basis:

حدوث التراص بكمية المصل على الشريحة وما يعادلها بالطريقة الأنبوبية.Agglutination at a given serum volume on the slide and its tube-method equivalent.

الطريقة الأولى: سطران، وهي الأسرع والأفضلMethod one: two rows, the fastest and best

توزَّع قطرات الكاشف على سطرين، ستّ قطرات في كل سطر بالترتيب O وH وPA وPB وAb وM.Lay out the reagent drops in two rows, six drops each, in the order O, H, PA, PB, Ab, M.

• السطر العلوي: يضاف إلى كل قطرة ٥ ميكروليتر مصل.Top row: add 5 µL of serum to each drop.
• السطر السفلي: يضاف إلى كل قطرة ٢٠ ميكروليتر مصل.Bottom row: add 20 µL of serum to each drop.
• امزج، ثم تحرَّ التراص بالعدسة المكبرة خلال ٩٠ ثانية.Mix, then look for agglutination with a magnifying lens within 90 seconds.

إذا كان السطران سلبيينIf both rows are negative

أهمل السطر العلوي وتابع على السطر السفلي فقط: أضف ٢٠ ميكروليتر مصل ليصبح المجموع ٤٠. إن ظهر التراص فالنتيجة ١/٤٠. وإن بقي سلبياً فأضف ٤٠ ميكروليتر ليصبح المجموع ٨٠: إن ظهر التراص فالنتيجة ١/٢٠، وإلا فالنتيجة سلبية.Ignore the top row and carry on with the bottom row only: add 20 µL of serum to make 40 in total. If agglutination appears the result is 1/40. If it stays negative, add 40 µL to make 80 in total: agglutination now means 1/20; otherwise the result is negative.

إذا كان السطر السفلي فقط إيجابياًIf only the bottom row is positive

أهمل السطر السفلي وتابع على العلوي فقط: أضف ٥ ميكروليتر ليصبح المجموع ١٠. إن ظهر التراص فالنتيجة ١/١٦٠. وإن بقي سلبياً فأضف ١٠ ميكروليتر للتأكيد ليصبح المجموع ٢٠، ولا بد أن يظهر التراص عندها، فتكون النتيجة ١/٨٠.Ignore the bottom row and carry on with the top row only: add 5 µL to make 10 in total. Agglutination now means 1/160. If it stays negative, add 10 µL to confirm, making 20 in total; agglutination must appear at this point, and the result is 1/80.

إذا كان السطر العلوي إيجابياًIf the top row is positive

العيار ١/٣٢٠ أو أعلى. أوقف العمل ومدّد المصل بالسالين، ثم ابدأ من جديد بقطرة كاشف و٥ ميكروليتر من المصل الممدّد. يقابل التمديد ١:٢ عيار ١/٦٤٠، والتمديد ١:٤ عيار ١/١٢٨٠، والتمديد ١:٨ عيار ١/٢٥٦٠.The titre is 1/320 or higher. Stop, dilute the serum in saline, and start again with a reagent drop and 5 µL of the diluted serum. A 1:2 dilution corresponds to 1/640, a 1:4 dilution to 1/1280 and a 1:8 dilution to 1/2560.

الطريقة الثانية: سطر واحدMethod two: a single row

بعد توزيع قطرات الكاشف على الشريحة في سطر واحد، تُضاف كميات المصل على مراحل إلى القطرات التي بقيت سلبية فقط، حتى تبلغ ٨٠ ميكروليتر:With the reagent drops laid out in a single row, serum is added in stages, to the drops that are still negative only, up to 80 µL:

• أضف ٥ ميكروليتر مصل إلى كل قطرة وتحرَّ التراص.Add 5 µL of serum to each drop and look for agglutination.
• أضف إلى القطرات السلبية ٥ ميكروليتر (المجموع ١٠).Add 5 µL to the negative drops (10 in total).
• أضف إلى القطرات السلبية ٣٠ ميكروليتر (المجموع ٤٠).Add 30 µL to the negative drops (40 in total).
• أضف إلى القطرات السلبية ٤٠ ميكروليتر (المجموع ٨٠)، ثم ثبّت النتيجة من الجدول.Add 40 µL to the negative drops (80 in total), then record the result from the table.

هذه الطريقة أبسط في التوزيع لكنها تحتاج إضافات أكثر، وتقفز من ١/١٦٠ إلى ١/٤٠، لذلك تبقى الطريقة الأولى هي المفضّلة حين يهمّ العيار الدقيق.This method is simpler to lay out but needs more additions and jumps from 1/160 to 1/40, so the first method remains the one to use when the exact titre matters.

ظاهرة المنطقة: لماذا يُخطئ الرايت أحياناًThe prozone effect: why the Wright test sometimes misleads

قد يعطي الرايت نتيجة سلبية كاذبة رغم وجود الإصابة عند البدء بـ ٥ ميكروليتر من المصل. السبب أضداد حاصرة لا تُحدث التراص، تظهر خصوصاً في المراحل المتأخرة من المرض وفي الحالات المزمنة، وتشغل مواقع المستضد فتمنع الأضداد المُراصّة من العمل حين يكون المصل مركّزاً. يمكن تلافي هذه الظاهرة بتمديد المصل بالسالين وإعادة الاختبار، فيظهر التراص عند التمديدات الأعلى.The Wright test can give a false negative despite infection when you start with 5 µL of serum. The cause is blocking antibodies that do not agglutinate. They appear especially later in the illness and in chronic cases, and they occupy the antigen sites so that the agglutinating antibodies cannot act while the serum is concentrated. The way round it is to dilute the serum in saline and repeat the test; agglutination then appears at the higher dilutions.

قبل كتابة التقريرBefore you write the report

• الفيدال اختبار داعم لا تشخيصي بذاته. زرع الدم في الأسبوع الأول من الحمى هو الاختبار المرجعي للحمى التيفية، وعيار مفرد واحد دليل ضعيف في المناطق التي ينتشر فيها المرض أو حيث يكثر التلقيح.Widal supports a diagnosis rather than making one. Blood culture in the first week of fever is the reference test for typhoid, and a single titre is weak evidence where the disease is common or vaccination is widespread.
• ارتفاع العيار أربعة أضعاف بين عيّنتين بفاصل ٧ إلى ١٠ أيام أقوى بكثير من قراءة واحدة مرتفعة.A fourfold rise in titre between two samples taken 7 to 10 days apart is far stronger than one high reading.
• الرايت الإيجابي بالشريحة يُؤكَّد باختبار التراص الأنبوبي (SAT)، ويفيد اختبار كومبس أو اختبار 2-ME في الحالات المزمنة والمشكوك فيها.A positive slide Wright test is confirmed with the tube agglutination test (SAT); the Coombs or 2-ME test helps in chronic and doubtful cases.
• اكتب العيار كما ظهر وأرفق بالتقرير حدّ الدلالة الذي يعتمده مختبرك، فالحدّ يختلف بين المناطق.Report the titre as found and state the significance threshold your laboratory uses, because the threshold differs from region to region.

اطلب الكواشفRequest reagents